蛋白濃度測(cè)定方法
蛋白濃度測(cè)定方法
微量凱氏定氮法：由于蛋白質(zhì)中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白質(zhì)溶液在280nm處具有紫外吸收高峰。在一定濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液在此波長(zhǎng)處的吸光度與其濃度呈正比關(guān)系，因此利用這一性質(zhì)可進(jìn)行蛋白質(zhì)定量測(cè)定。微量凱氏定氮法迅速、簡(jiǎn)便、不消耗樣品、低濃度鹽類不干擾測(cè)定，可測(cè)定0.1～1.0mg/mL的蛋白質(zhì)溶液。
樣品與濃硫酸共熱，含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據(jù)此酸液被中和的程度可計(jì)算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例，其反應(yīng)式如下：
CH2COOH
| + 3H2SO4 ? 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)
NH2
2NH3 + H2SO4 ? (NH4)2SO4 (2)
(NH4)2SO4 + 2NaOH ? 2H2O +Na2SO4 + 2NH3 (3)
反應(yīng)（1）、(2)在凱氏瓶?jī)?nèi)完成，反應(yīng)（3）在凱氏蒸餾裝置中進(jìn)行。
為了加速消化，可以加入CuSO4作催化劑，K2SO4以提高溶液的沸點(diǎn)。收集氨可用硼酸溶液，滴定則用強(qiáng)酸。計(jì)算所得結(jié)果為樣品總氮量，如欲求得 樣品中蛋白含量，應(yīng)將總氮量減去非蛋白氮即得。如欲進(jìn)一步求得樣品中蛋白質(zhì)的含量，即用樣品中蛋白氮乘以6．25即得。中國(guó)糧油儀器在線 http://www.radiant-cloud.com
