蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)的不斷創(chuàng)新
為了對(duì)樣品進(jìn)行合理的分析，我們需要對(duì)蛋白質(zhì)的具體組成結(jié)構(gòu)進(jìn)行合理的研究。蛋白質(zhì)和一些抗體的研究已經(jīng)是現(xiàn)在農(nóng)業(yè)上比較重要的一項(xiàng)技術(shù)開(kāi)發(fā)了，是進(jìn)行優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)篩選的最適宜的一項(xiàng)措施。然而現(xiàn)在蛋白質(zhì)的技術(shù)研究還是存在著一些局限性的，這些還是有待于我們?nèi)「纳啤Ｎ覀冊(cè)谘芯康倪^(guò)程中是需要使用自動(dòng)型凱氏定氮儀來(lái)完成的，基于固定在幾個(gè)平方微米上的作用單元的/微點(diǎn)0分析在原理上比傳統(tǒng)的肉眼可見(jiàn)的免疫分析具有更高的靈敏度,更適于對(duì)分析物的測(cè)定。
作為蛋白質(zhì)天然結(jié)合物的抗體以一定的排列方式被固定在固體載體上形成了抗體微陣列。與此對(duì)應(yīng),發(fā)展了蛋白質(zhì)微陣列技術(shù)以研究蛋白質(zhì)的相互作用和修飾。盡管這些陣列被設(shè)想成為研究酶或抗體特異性的特征及闡明基因功能的一種有用工具,但這一技術(shù)存在的許多缺陷還未得到解決,限制了其潛在作用的完全發(fā)揮。這些限制因素包括生成足夠的量、在固化過(guò)程中保持蛋白質(zhì)的功能,以及提供所需的相對(duì)和絕對(duì)靈敏度。
發(fā)展高容量的微陣列的步驟之一包括了通過(guò)高密度細(xì)菌斑點(diǎn)在硝酸纖維素膜上產(chǎn)生陣列。細(xì)菌表達(dá)和分泌的抗體片段提供給以濾膜為基質(zhì)的 ELISA,用于辨別對(duì)供試抗原有特異性的抗體片段。所考慮的最后的步驟是在包被的玻璃片上純化的蛋白質(zhì)和抗體斑點(diǎn)的微縮化。玻璃片的剛性結(jié)構(gòu)使得增加特征基團(tuán)的密度及在降低樣品溶液量的情況下提供定量化的分析成為可能。微陣列基質(zhì)的一個(gè)關(guān)鍵條件是提供優(yōu)化的結(jié)合條件。
始終存在對(duì)于具有低非特異性背景和低差異性的高結(jié)合能力的關(guān)鍵需求。三維凝膠或膜包被的表面,如聚丙烯酰胺、瓊脂糖和硝酸纖維素。這類(lèi)表面主要通過(guò)物理吸附結(jié)合蛋白質(zhì),其優(yōu)點(diǎn)在于它們被認(rèn)為最適于保持天然蛋白質(zhì)構(gòu)像。然而,這類(lèi)表面的缺點(diǎn)是信號(hào)強(qiáng)度的差異性較大.包括表面包被如樹(shù)突或抗生物素蛋白片,結(jié)合了前兩類(lèi)表面后,在表面上表現(xiàn)出一種超分子結(jié)構(gòu)。中國(guó)糧油儀器在線 http://www.radiant-cloud.com/
